#非洲猪瘟#监测排查是防控非洲猪瘟等重大动物疫病重要方面，只有通过监测排查，才能找到可能感染的个体，对可能感染的个体通过进一步采样检测，才能确诊是否感染，一旦确认感染，才能采取进一步措施，如精准清除、隔离、消毒、限制流通等控制传染源和切断传播途径，达到有效防控疫情蔓延，最终实现控制和消灭传染病。
所以说”非洲猪瘟监测排查、检测与精准清除技术”，对于我们开展非洲猪瘟等重大动物疫病防控，恢复生猪生产具有非常重要的意义。
1非洲猪瘟监测排查技术
非洲猪瘟监测排查就是根据非洲猪瘟（ASF）流行病学、临床症状、病理剖检变化关联等特点开展现场排查，找到感染猪，必要时采集疑似感染猪病料进行实验室检测，对检测为ASF感染阳性的猪群采取扑杀、消毒和无害化处理等措施，消灭病原，切断传播途径，达到有效防控疫情蔓延，最终消灭ASF的目的。
农业农村部要求：“按照养殖、交易、屠宰环节排查全覆盖，生猪养殖场（户）监测全覆盖的要求，在全国范围内部署开展监测排查”，做到早发现早处置，切断传播链条。
1.1排查前准备
1.1.1人员准备
了解非洲猪瘟基本知识。了解非洲猪瘟感染与传播的高风险因素。了解排查工作中需遵守的生物安全操作要求，避免人为造成的传播。了解非洲猪瘟排查工作的沟通方法。
1.1.2车辆准备
车辆必须彻底清洗消毒。车辆不携带无关物品。在车内、车的后备箱里铺塑料布防止污染。
1.1.3物品准备
包括防护服、口罩、手套、护目镜、器械箱、消毒液等进场所需材料，和记号笔、剪刀、采血管、冻存盒、注射器、酒精灯等采样所需材料。
1.2进出养殖场要求
1.2.1到达养殖场
车辆停在养殖场外。在养殖场清洁区，穿戴个人防护设备。进入养殖场生产区前，清空衣服口袋，按照养殖场进场程序进入生产区域。电子设备应放置在密封的塑料袋中，以便随后进行清洁和消毒。消毒工作要在清洁干燥的地面进行。
1.2.2进出养殖场
1.2.2.1抵达养殖场
车辆停在养殖场外。进入养殖场生产区前，清空衣服口袋，按照养殖场进场程序进入生产区域。电子设备应放置在密封的塑料袋中，以便随后进行清洁和消毒。消毒工作要在清洁干燥的地面进行。
1.2.2.2穿戴个人防护设备
脱下鞋子，并放在塑料布上。需要脱去全部个人衣服，洗澡后穿戴养殖场内部衣服方可进场。首先穿戴一次性防护服，穿上靴子，戴手套，手套要用胶带封上。靴套至少覆盖胶鞋底部和下部。
1.2.2.3离场前准备
对接触过养殖场的所有物品进行清洗和消毒处理。脱下鞋套放入非清洁区的垃圾袋中，然后彻底擦洗靴子。脱下手套、一次性防护服并放入非清洁区的垃圾袋中。脱下靴子，对靴子进行消毒后放入清洁的袋子里。手和眼镜也必须进行消毒，并用消毒湿巾清洁脸部。在离开可能受到污染的区域之前，清洁和消毒汽车的轮胎和表面。处理车内所有垃圾并清理所有污垢。用浸有消毒剂的布擦拭方向盘、变速杆、踏板、手闸等。
1.2.2.4离场后
如家中没有饲养生猪，可以回家淋浴并彻底清洗头发。将当天所穿衣服浸泡在消毒剂中30分钟；如果家中饲养生猪，应在其他地方进行清洗。如果进入了疑似感染场，确诊前不应前往任何饲养生猪的场所。如果确认该场感染了非洲猪瘟，三天内不应前往任何有猪的场所。再次对汽车内部和外部进行消毒。清除汽车上的所有塑料布，并妥善处理。
1.3现场排查
监测排查人员在排查时负责收集有关场所和动物的相关信息，至少包含以下信息：场所地址及地理信息；疑似染疫动物种类和数量、存栏量、发病和死亡情况；临床症状和病理变化的简要描述；发病猪同群情况；猪场布局及周边环境是否饲喂泔水；免疫情况；近一个月调入和调出情况等。
1.3.1流行病学排查
传染源：感染非洲猪瘟病毒的家猪、野猪（包括病猪、康复猪和隐性感染猪）和钝缘软蜱等为主要传染源。
传播途径：主要通过接触非洲猪瘟病毒感染猪或非洲猪瘟病毒污染物（餐厨废弃物、饲料、饮水、圈舍、垫草、衣物、用具、车辆等）传播，消化道和呼吸道是最主要的感染途径；也可经钝缘软蜱等媒介昆虫叮咬传播。
易感动物：家猪和野猪。其它哺乳动物包括人类均不感染非洲猪瘟病毒。不同品种、日龄和性别的猪均对非洲猪瘟病毒易感。
1.3.2临床症状排查
发病猪只体温41~42℃，皮肤黄染或发绀，呼吸困难，不愿运动。个别猪排血便，部分猪站立不稳，出现倒地抽搐、四肢呈划水状等神经症状。
主要临床症状：无症状突然死亡；发病率、病死率高；高热，体温升高40.5至42℃；耳、四肢、腹背部皮肤有出血点、发绀；呕吐，腹泻或便秘，粪便带血；虚弱、步态僵直，不愿站立等；偶见眼、鼻有黏液脓性分泌物。
其他临床症状：精神沉郁、食欲下降；呼吸困难，湿咳；关节疼痛、肿胀；妊娠母猪流产、死胎、弱仔。
图1发病猪只临床症状
1.3.3病理剖检排查
病死猪脾脏肿大，大小约为正常脾脏的4-5倍，呈紫褐色；肺部支气管有大量淡黄色渗出液；腹腔大量积液呈血红色；肾脏肿大，肾乳头肿大，见淡黄色胶冻样渗出；肠系膜淋巴结/下颌淋巴结肿胀、出血；腹股沟淋巴结肿大、出血，呈紫褐色；淋巴结切面潮红，指压时有血液渗出；胃肠粘膜出血；心脏的心耳处有大量出血，心内膜见紫褐色出血斑；十二指肠、回肠、直肠出血，肠内容物呈焦油色。
图2病死猪脾脏、肺脏、腹腔、肾脏病变
图3病死猪淋巴结病变
图4病死猪胃粘膜、心脏、肠道、肠粘膜病变
1.3.4发现疑似病例处置
发现疑似病例，应立即按照《非洲猪瘟疫情应急实施方案（年第二版）》要求上报疫情。对发生可疑和疑似疫情的相关场点实施严格的隔离、监视，并对该场点及有流行病学关联的养殖场（户）进行采样检测。禁止易感动物及其产品、饲料及垫料、废弃物、运载工具、有关设施设备等移动，并对其内外环境进行严格消毒。必要时可采取封锁、扑杀等措施。
1.4样品的采集
1.4.1采样物品：采样液（磷酸盐缓冲液保护液（含30%甘油和10%双抗））、75%酒精、灭菌拭子、含EDTA无菌采血管、采血针、采样管、剪刀、记号笔、采样单、签字笔、一次性封口袋、冰袋、采样箱。
1.4.2猪粪（环境）拭子
1.4.2.1猪粪拭子
采样管加入采样液（磷酸盐缓冲液保护液（含30%甘油和10%双抗））。用灭菌拭子采集像黄豆一样大小的粪便，放入采样管中。编号，冷冻保存。
1.4.2.2环境拭子
采样管加入采样液（磷酸盐缓冲液保护液（含30%甘油和10%双抗））。用灭菌拭子充分浸润采样液，在管壁上反复挤压几下，弃去多余的液体。在不同环境部位擦拭，每个部位擦拭至少5次。将拭子头浸入采样液中，把拭子头部与管壁接触几下，使样品尽量多的保存在采样液中。编号，冷冻保存。
1.4.3眼鼻拭子、肛拭子
采样管加入采样液（磷酸盐缓冲液保护液（含30%甘油和10%双抗））。用灭菌拭子蘸取眼结膜、鼻腔内的分泌物后立即浸入保存液（磷酸盐缓冲液保护液（含30%甘油和10%双抗））中。另取一个拭子插入动物肛门中，采取直肠粘液或粪便浸入保存液中。平行采集猪的眼鼻拭子、肛拭子放入1个采样管中，编号，冷冻保存。
1.4.4组织样品
1.4.4.1耳尖组织
采集2平方厘米病猪耳尖组织，放入采样管中。编号，冷冻保存。
1.4.4.2脾脏、淋巴结
在病变和健康组织交接处三个部位采集5g组织，放入采样管中。编号，冷冻保存。
1.4.5全血
用含有EDTA的无菌采血管采集5mL全血，足量采集后轻柔上下颠倒几次后，加冰袋或4℃保存。
1.4.6猪产品
采集5g猪产品，放入采样管中。编号，冷冻保存。
1.5实验室检测
最常用的是实时荧光定量PCR方法，检测组织悬液（脾、淋巴结、肾、扁桃体、肝、肺、腐败组织、骨髓）、抗凝血、血液等样本中的病毒核酸。中国动物疫病预防控制中心发布的《非洲猪瘟实验室检测操作程序》中的检测流程如下：
1.5.1qPCR试剂配制：取出试剂盒，从中取出实验所需试剂，融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着的液体；按需吸取各组份试剂，配成qPCR反应液，在各PCR管中分别加入qPCR反应液18uL，转移至样品提取区。注意：务必设置反应阳性对照和反应阴性对照。
1.5.2样品处理
全血样品：采用自然析出或离心方式获得血清，将血清移至新的样品管密封好后标记编号。
抗凝血样品：取抗凝血样品1mL至新的样品管中，密封后标记编号。
拭子样品：取上清液1mL至新的样品管中，密封后标记编号。
组织样品或猪产品：用灭菌的1×PBS（0.01M，pH7.2）中制备10%组织匀浆液；以g（或转/分）离心10分钟；将上清液移至新的样品管中，密封后标记编号。
将前述预处理好的样品（血清、抗凝血、组织）放入60°C水浴中灭活30分钟，期间每隔5分钟颠倒混匀样品一次。
1.5.3核酸提取：灭活好的样品用核酸提取工作站提取病毒DNA。注意：务必设置提取阳性和提取阴性对照。
1.5.4体系配制：在分装好qPCR反应液的PCR管中加入提取的病毒DNA2uL，混匀，瞬时离心，转移至扩增分析区。
1.5.5扩增检测：将各PCR管放置在仪器样品槽相应位置，并记录放置顺序，设置反应程序，扩增结束后根据说明书判读条件，分析结果，得出结论。
2非洲猪瘟精准清除技术
依据农业农村部《非洲猪瘟疫情应急实施方案（年第二版）》有关“在疫情防控检查、监测排查、流行病学调查和企业自检等活动中，检出非洲猪瘟核酸阳性，但样品来源地存栏生猪无疑似临床症状或无存栏生猪的，为监测阳性。”的规定，猪场在早期监测排查与自检活动中，对监测阳性个体或群体，采取定点精准清除技术，迅速清除感染源。
2.1清除感染源
2.1.1整栏清除
在非洲猪瘟传入早期，保育、育肥群体异常猪数量较少，聚集在同一栏内，可实施整栏清除。
2.1.2整栋清除
阳性病例呈多点散发状态，仅局限于一栋猪舍，其他猪舍未检出非瘟感染阳性猪；猪舍之间有可靠的物理隔离屏障；清除过程中，严格限制场内员工串舍行为，人员不可与相邻猪舍接触。
2.1.3单元清除
如果在不同养殖单元检出非瘟核酸阳性，且不同单元有物理隔断或密闭设施相互分隔，猪群之间不会通过饮水或排污设施发生交叉感染，工作人员不交叉，可以实施单元清除。
2.1.4全场清除
如果不同圈舍均有阳性感染或确诊的病猪，呈点状扩散状态，而且是通槽喂水、喂料，即使不同圈舍之间有严格的物理隔离或其他屏障，应实施全场清除。
2.2精准清除的策略
2.2.1无法移动的感染猪
可电击处死后，装入密闭袋，包封后使用过硫酸氢钾复合盐类（威特利剑，1:倍稀释）、或醛类复方消毒剂（戊二醛癸甲溴铵溶液，1:倍稀释）、或醛类消毒剂（威特醛，1:倍稀释）对编织袋进行喷洒，外运过程中经过廊道必须铺设彩条布、地毯防止扩大污染面，实施无害化处理。
2.2.2可以正常移动的感染猪
体重过大的感染猪，驱赶至无害化处理点再用电击处死，在赶猪通道的地面要铺上塑料或彩条布等；对体重较小的感染猪，可直接在猪舍内电击处死后，装入密闭袋中运到无害化处理点；对淘汰猪移动过程中所经过的路面用2%的氢氧化钠进行彻底消毒；为减少交叉感染，原则上，在扑杀清除猪的工作中，不使用不同圈舍的工作人员，可使用后勤或办公人员；扑杀和无害化处理结束后，参与扑杀行动的人员需进行洗澡，隔离7天，衣服和胶靴必须浸泡、消毒及烘干后方可继续使用。
2.3精准清除后的消毒措施
2.3.1地面消毒
使用2%的氢氧化钠对空舍地面、栏位等进行泼洒，每天3次。后期可用火焰喷射器处理，确定火焰消毒时间，保证火焰消毒效果。廊道内转猪彩条布及地毯使用2%的氢氧化钠喷洒，将彩条布向内卷防止污染。使用运感染猪专用车辆将彩条布地毯运至指定地点焚烧，灰烬用生石灰全覆盖。
2.3.2用具消毒
最好使用一次性防护服，处置后进行焚烧。个人衣物使用过硫酸氢钾复合盐类（威特利剑，1:倍稀释）、或醛类复方消毒剂（戊二醛癸甲溴铵溶液，1:倍稀释）、或醛类消毒剂（20%浓戊二醛溶液（如威特醛），1:倍稀释）浸泡消毒，各种工具用水枪冲洗干净。使用过硫酸氢钾复合盐类（威特利剑，1:倍稀释）、或醛类复方消毒剂（戊二醛癸甲溴铵溶液，1:倍稀释）、醛类消毒剂（威特醛，1:倍稀释）浸泡消毒。
2.4精准清除后的监测
猪场清除感染猪后，对全场猪群和环境采样监测，在21天内每间隔7天，采用全覆盖采样进行荧光定量PCR检测，检测均为阴性且猪群无异常，精准清除才算获得成功。